Αίθουσα στο Παλάτι του Αγίου Ρόουντ. Λέει ότι η πόλη έχει ταραχές. Κάποιος άγνωστος σε αυτόν στο κεφάλι του πλήθους - μούρες, μασκοφόροι, χορευτές με κουδούνια, άνθρωποι με μαύρες κουκούλες - απείλησαν, πρόβλεψαν και προέτρεψαν τους ανθρώπους να μην υπακούσουν στη βασίλισσα. Ο δικαστής της Βασίλισσας Ρίτσιου επιβεβαιώνει ότι παρακολουθεί επίσης κατά καιρούς καθώς οι άνθρωποι ακούνε με ανυπομονησία αυτά τα κηρύγματα. Η σελίδα λέει επίσης ότι οι άνθρωποι έσπασαν στο παρεκκλήσι της βασίλισσας φωνάζοντας: «Η φωλιά των παπιστών!», Ότι ο ζαχαροπλάστης του Ντάρνλι, ο σύζυγος της βασίλισσας, πήδηξε στο βωμό και άρχισε να προσποιείται ότι είναι κήρυγμα, και οι άνθρωποι του απάντησαν με κοροϊδευτικά δίστιχα. Η βασίλισσα Mary Stuart σε απόγνωση. Νιώθει το μίσος του λαού · οι περισσότεροι από τους αυλούς την έχουν αφήσει. αναρωτιέται πώς ο Χριστιανισμός της μπορεί να είναι τόσο διαφορετικός από τον Χριστιανισμό των ανθρώπων της Σκωτίας. Ο Riccio προτείνει να προετοιμάσει αμέσως ένα διάταγμα που τιμωρεί τους υπεύθυνους για τις ταραχές. Η Μαρία υπαγορεύει τη σελίδα του, η σελίδα διευκρινίζει εάν θα εισαγάγει το όνομα του Χάινριχ Ντάρνλι, του συζύγου της βασίλισσας. Η Μαίρη διστάζει. υποψιάζεται ότι οι ταραχές ήταν εμπνευσμένες από αυτόν - σε τελική ανάλυση, το πλήθος καθοδηγούταν από τον βασιλιά του βασιλιά. Εδώ ο Riccio της υπενθυμίζει ότι είναι η βασίλισσα. είναι σαν τον ήλιο, και έχει το δικαίωμα να τιμωρήσει από τον Θεό. Απαιτεί να καλέσει αμέσως τον υπεύθυνο για να ανακοινώσει το διάταγμα της Βασίλισσας. Ο Ντάγκλας μπαίνει. Η Μαρία του λέει να πάρει το χαρτί στον Βασιλικό Καγκελάριο Μόρτον, για να σφραγίσει. Ο Ντάγκλας σαρώνει το διάταγμα και βλέπει ότι δεν έχει το όνομα του βασιλιά. Ρωτά τη βασίλισσα για αυτό. Η Riccio είναι υπεύθυνη γι 'αυτήν. Ο Ντάγκλας χάνει την ψυχραιμία του. Προτρέπει τη βασίλισσα να μην χρησιμοποιήσει μέτρα αιματηρής καταστολής, υπαινίσσεται ότι το βλέπει ως γαλλική ή ιταλική επιρροή. Αλλά η βασίλισσα του υπενθυμίζει κρύα τη δύναμή της να εξαλείψει τα άτομα που είναι ανυπάκουα στη θέλησή της. Ξεσπά μια διαμάχη μεταξύ του Ρίτσιου και του Ντάγκλας, ο Ντάγκλας προκαλεί τον Ρίκιο σε μονομαχία και ορκίζεται ότι θα σκοτώσει αύριο τον Ενετό. Η βασίλισσα φεύγει και παίρνει τον Riccio. Ο Ντάγκλας μένει μόνος, σκέφτεται μονομαχία. Ο Μόρτον μπαίνει. Ο Ντάγκλας του δείχνει το διάταγμα. Ο Μόρτον είναι αναποφάσιστος: φοβάται την οργή τόσο του βασιλιά όσο και της βασίλισσας. Χωρίς σφράγιση, ο Μόρτον προσφέρει στον βασιλιά. Αυτή τη στιγμή, ο Χένρι είχε συνομιλήσει με τον αστείο του Νικ, ο οποίος τον πειράζει με το γεγονός ότι η βασίλισσα έχει πραγματική δύναμη στη Σκωτία, και ο Χένρι είναι μόνο ο σύζυγός της, ότι η βασίλισσα επιλέγει στενούς, για παράδειγμα, αυτός ο Ιταλός αρπίστας Ρίτσιο ... Αυτή τη στιγμή, ο Μόρτον φέρνει ένα ατυχές διάταγμα. Βασιλιάς σε θυμό, αποφασίζει να σκοτώσει τον Ρίτσιό. Ο Βασιλιάς Λίντσεϊ μπαίνει στο δικαστήριο, καλεί τον βασιλιά να κυνηγήσει με το νεοαποκτηθέν γεράκι. Ο Μόρτον απαντά ότι ο βασιλιάς έχει ήδη κατοχή σήμερα. Ο Lindsay συμμετέχει πρόθυμα στο σχέδιο εναντίον του Riccio. Απαγορεύει κυριολεκτικά να σκοτώσει τον Riccio απόψε, γιατί πρέπει να τον σκοτώσει αύριο το πρωί. Τότε ο Χένρι, εκμεταλλευόμενος την καθυστέρηση, στέλνει τον αστείο στον αστρολόγο για να μάθει ποια είναι η θέση των αστεριών για τις προθέσεις του.
Ο αστρολόγος στο εργαστήριό του (είναι επίσης αλχημιστής) υποστηρίζει με τον εαυτό του ότι η εμπειρία επιβεβαιώνει τη ματαιότητα της επιστήμης, ότι ο σκοπός, η θέληση των αστεριών κυριαρχούν στον άνθρωπο, διαθέτουν καλό και κακό. Ο Νικ μπαίνει, ψεκάζει με πνευματικούς λόγους, ο αστρολόγος δεν είναι κατώτερος από αυτόν στο πνεύμα. Ο Νικ αναφέρει ότι ο βασιλιάς τον έστειλε για να ρωτήσει για τη μοίρα του Ρίτσιου και λέει στον αστρολόγο να προβλέψει το θάνατο του Ρίτσιου. Ο αστρολόγος απαντά ότι τα αστέρια θα του πουν, όχι τους ανθρώπους, και με τη σειρά του προβλέπει το θάνατο του γελωτού. Με αυτό φεύγει. Εμφανίζεται η σελίδα της βασίλισσας που προκαλείται από τον αστρολόγο. Η σελίδα αγαπά την ερωμένη του. Ο αστρολόγος του λέει να πει στη βασίλισσα ότι σήμερα ο άντρας που αγαπά θα πεθάνει. «Πώς θα πεθάνει σήμερα ο Μπότγουελ;» - αναφωνεί μια σελίδα. Ο αστρολόγος μπερδεύεται. Είχε στο μυαλό τον Riccio και βιάζει τη σελίδα για να τον προειδοποιήσει για αυτό. Αφήνοντας μόνοι του, ο αστρολόγος αναρωτιέται - φαίνεται επίσης από τα αστέρια ότι ο Μπότγουελ συνδέθηκε κάπως σκοτεινά με τη βασίλισσα - μέσω του Άρη, του Κρόνου ... μπαίνει ο Μπότγουελ. Από το μονόλογό του, γίνεται σαφές ότι βρέθηκε απροσδόκητα στο σπίτι ενός αστρολόγου. Συνειδητοποιώντας πού πήρε, ο Μπότγουελ ρωτάει τον αστρολόγο πόσα έχει απομείνει για να ζήσει. Ο γέρος απαντά ότι τρία χρόνια και ότι ο Μπότγουελ θα είναι βασιλιάς. Ο botwell βγάζει ένα μπουκάλι δηλητήριο με το οποίο ήθελε να αυτοκτονήσει, θέλει να το πετάξει - και διστάζει. Πράγματι, στην ατμόσφαιρα των ίντριγκες των παλατιών, οποιοδήποτε όπλο θα είναι χρήσιμο. Φεύγει.
Η σελίδα λέει στη βασίλισσα ότι ο Riccio θα έρθει σύντομα. Η βασίλισσα τον ανυπομονεί - κατά τη γνώμη της, παρέμεινε μόνος πιστός σε αυτήν. «Και Μποτβελ;» Η σελίδα ρωτά. "Ποιος είναι ο Botvel;" - η βασίλισσα ενδιαφέρεται. Μια έκπληκτη σελίδα λέει στη Μαρία πώς, ενώ βαρκάρισε, ένας δυνατός άνεμος έσβησε ένα τριαντάφυλλο από το κεφάλι της βασίλισσας, ένα λουλούδι έπεσε στο νερό. Και τότε ένας από τους αυλούς - Μπότβελ - έσπευσε στο σκάφος και κυνηγούσε φοβισμένα τον κωπηλάτη για να πιάσει ένα τριαντάφυλλο από το νερό. Αφού άκουσε την ιστορία, η Μαρία στέλνει μια σελίδα για να προσευχηθεί. Ομολογεί στο Θεό ότι δεν έχει πλέον δύναμη να αντισταθεί στην αγάπη της για τον Μπότγουελ. Η βασίλισσα γνωρίζει ότι στο δικαστήριο θεωρείται ερωτευμένη με τον Riccio. Ο Riccio μπαίνει. Η Μαίρη αναφέρει έναν θανάσιμο κίνδυνο που τον απειλεί και κρύα τον αποχαιρετά, δείχνοντάς τον στο πλοίο που θα τον οδηγήσει στη Ρώμη. Σε απόγνωση, ο Ρίτσιου προσπαθεί να παρακαλέσει τη βασίλισσα να ακυρώσει την απόφαση να φύγει. Η βασίλισσα είναι ανένδοτη.
Ο Χάινριχ, ο Μόρτον και ο Λίντσεϊ έμαθαν για την επικείμενη αναχώρηση του Ρίτσιου και έδωσαν βιαστικά να τον σκοτώσουν ή να τον αφήσουν να πλεύσει. Τότε ο Ντάγκλας εμφανίζεται και αναφέρει ότι ο Ρίτσιό έχει ήδη πλεύσει. Ο Ντάγκλας σε απόγνωση, λαχταρά για αιματηρή εκδίκηση, η ιπποτική του τιμή είναι πληγωμένη. Ξαφνικά συναντούν μια σελίδα που φέρνει στη βασίλισσα ένα σημείωμα από τον Riccio - δεν έφυγε και θα είναι μαζί της το βράδυ. Οι συνωμότες αφαιρούν τη νότα.
Η Μαρία ασχολείται με το κέντημα στο δωμάτιό της. Ο Riccio, που ήρθε, της εξηγεί ότι δεν μπορούσε να φύγει, γιατί έχει μια μονομαχία με τον Ντάγκλας το πρωί. Παραδέχεται ότι δεν χρειάζεται ζωή χωρίς την αγάπη της. Ζητά από τη Μαρία να του δώσει ένα στεφάνι από τριαντάφυλλα - θα φυτέψει λουλούδια στο βωμό στη Ρώμη ... Ο Χένρι, ο Ντάγκλας και ο Νίντσεϊ μπήκαν και σκοτώσουν τον Ρίτσιό. Η βασίλισσα λιποθυμά. Ο Ντάγκλας χτυπιέται από ντροπή και τρόμο - αποχωρεί οικειοθελώς. Ο Χένρι ανησυχεί αν η βασίλισσα θα τον μισήσει. Ο Lindsay παίρνει τον βασιλιά μακριά, ψιθυρίζοντας σε αυτόν για το επερχόμενο κυνήγι. Η Βασίλισσα Μπότγουελ προσκαλείται από τη Βασίλισσα. Η Μαίρη έρχεται στις αισθήσεις της, βλέπει τον Μποτβέλ και ομολογεί την αγάπη του. Το botvel την αναγκάζει να παραδεχτεί ότι θέλει τον θάνατο του Χένρι και της δίνει ένα μπουκάλι δηλητήριο, λέγοντας ότι αυτό είναι ένα χάπι ύπνου. Η Μαρία μεταβιβάζει το «φάρμακο» στον βασιλιά, αλλά το δηλητήριο πίνει το βούκινο. Ωστόσο, τίποτα δεν μπορεί να σταματήσει τη δολοφονική ίντριγκα - ο Μπότγουελ εκρήγνυται το σπίτι του βασιλιά Χένρι. Στο βάθος, ακούγονται οι αυξανόμενες κραυγές του πλήθους. Το botvel με τη βασίλισσα κρύβονται.